Isolamento e caracterização imunológica de roptrias de Neospora caninum

Autores

  • Thais Agostinho Martins Universidade de Maringá, Faculdade de Medicina Veterinária
  • Luiz Daniel De Barros Universidade Federal de Lavras, Departamento de Medicina Veterinária
  • Beatriz De Souza Lima Nino Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva
  • Juliana Correa Bernardes Universidade Positivo, Faculdade de Medicina Veterinária
  • Ana Clécia Dos Santos Silva Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva
  • Ana Flávia Minutti Universidade Federal de Lavras, Departamento de Medicina Veterinária
  • Sergio Tosi Cardim Universidade Norte do Paraná, Faculdade de Medicina Veterinária
  • Milena Patzer Rose Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva
  • Valentina Martinez Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva
  • João Luis Garcia Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva https://orcid.org/0000-0003-1826-7582

DOI:

https://doi.org/10.11606/issn.1678-4456.bjvras.2024.219874

Palavras-chave:

Neospora caninum, Neosporose, Organelas, Roptrias, Fracionamento

Resumo

Neospora caninum é um parasita que causa perdas consideráveis na pecuária bovina. Compreender os seus mecanismos de infecção é essencial para compreender o seu impacto nos rebanhos. O fracionamento celular e a caracterização das frações poderão contribuir para a seleção de proteínas e organelas com características imunogênicas. Assim, o presente estudo teve como objetivo isolar frações roptrias e subcelulares de N. caninum utilizando gradiente de sacarose e caracterizar sua imunogenicidade em camundongos. Taquizoítos da cepa Nc-1 foram cultivados em células VERO, fracionados por esferas de vidro e ultracentrifugados em gradiente de sacarose variando de 0,25 a 1,8 M. As frações foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Cada fração foi inoculada com adjuvante Quil-A (20 μg) em camundongos para produzir anticorpos policlonais para cultura de células de imunofluorescência e western blotting. A ultracentrifugação resultou em três frações distintas (F1, F2 e F3) e um pellet. A fração um (F1) na concentração de 1,0 M continha membranas do parasita, F2 a 1,4 M continha roptria e conoide, F3 a 1,6 M continha mitocôndrias e o sedimento na fração de 1,8 M continha restos celulares. As quatro frações exibiram as mesmas bandas com pesos moleculares de 50, 51, 52 e 62 kDa. Apenas F2 apresentou estruturas de roptria e uma proteína de 54 kDa semelhante a NcROP2. Este estudo separou com sucesso frações subcelulares de N. caninum através de processamento e ultracentrifugação, identificou estruturas de roptria e determinou pesos específicos de proteínas de cada fração. 

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Publicado

2024-08-12

Edição

v. 61 (2024)

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Como Citar

1.
Martins TA, Barros LDD, Nino BDSL, Bernardes JC, Silva ACDS, Minutti AF, et al. Isolamento e caracterização imunológica de roptrias de Neospora caninum. Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci. [Internet]. 12º de agosto de 2024 [citado 21º de novembro de 2024];61:e219874. Disponível em: https://journals.usp.br/bjvras/article/view/219874